NANOPARTÍCULAS DE ALBUMINA CARREADORAS DE SIRNAS: OTIMIZAÇÃO DO SILENCIAMENTO GÊNICO EM MODELO CELULAR DE CÂNCER DE PULMÃO

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Resumo

O câncer de pulmão é a neoplasia com a maior taxa de mortalidade no mundo, tornando urgente o desenvolvimento de abordagens terapêuticas eficazes e direcionadas. Nesse contexto, a utilização de pequenos RNAs de interferência (siRNAs) surge como uma alternativa promissora para o silenciamento de oncogenes essenciais, como o fator de transcrição STAT3, frequentemente associado à proliferação tumoral e à resistência quimioterápica. No entanto, a aplicação clínica desses siRNAs enfrenta desafios relacionados à instabilidade em meios biológicos, ativação de respostas imunes, susceptibilidade à degradação enzimática, e baixa permeabilidade através das membranas celulares. Para mitigar esses desafios e permitir a aplicação eficiente de siRNAs, carreadores biocompatíveis têm sido desenvolvidos, dentre os quais se destacam nanopartículas lipídicas e nanopartículas proteicas (PNPs). Entre as PNPs, nanopartículas de albumina humana (HSA-PNPs) vem recebendo atenção crescente devido à facilidade de preparo, baixo custo, além de biocompatibilidade e biodegradabilidade intrínsecas. No entanto, apesar de promissoras para o transporte de siRNAs, as HSA-PNPs ainda enfrentam desafios relacionados à internalização celular e à entrega citosólica do agente terapêutico. Diante desse cenário, o objetivo deste trabalho é avaliar a taxa de internalização celular de HSA-PNPs e a eficácia de silenciamento do gene STAT3 utilizando diferentes formulações de HSA-PNPs responsivas a estímulos biológicos, como pH e concentrações citoplasmáticas de glutationa (GSH), visando otimizar o escape endossomal e potencializar o efeito terapêutico em células tumorais de pulmão. Para os ensaios, o projeto utilizará como modelo biológico a linhagem de adenocarcinoma de pulmão humano (A549), na qual serão analisados e comparados quatro grupos distintos de HSA-PNPs carregadas com siRNA anti-STAT3: formulações não-responsivas, responsivas ao pH, responsivas à [GSH], e responsivas simultaneamente a ambas as condições. Além disso, essas formulações serão comparadas a grupos controle utilizando Lipofectamine como controle positivo, HSA-PNPs sem RNA, e HSA-PNPs contendo siRNA scrambled. Os testes irão analisar a eficiência de captação e a cinética de endocitose das HSA-PNPs por meio de citometria de fluxo. A avaliação do silenciamento gênico será realizada pela quantificação do knockdown da expressão de STAT3, a partir dos níveis de mRNA mensurados por RT-qPCR. Paralelamente, a redução da expressão da proteína correspondente será validada e quantificada por ensaios de Western blot. Por fim, a eficácia terapêutica e a viabilidade celular serão investigadas por ensaios específicos. Como forma de validação inicial do sistema, HSA-PNPs carreando siRNA para GFP serão avaliadas quanto à capacidade de silenciamento em células A549-GFP. Até o momento, obtivemos sucesso no preparo das HSA-PNPs, no encapsulamento de siRNA-GFP, e em testes preliminares de silenciamento de GFP em células A549-GFP, avaliados por citometria de fluxo.