ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE LINHAGENS DE BURKHOLDERIA CENOCEPACIA POR EVOLUÇÃO EXPERIMENTAL

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Resumo

A bactéria Burkholderia cenocepacia é conhecida por causar infecções oportunistas em indivíduos imunossuprimidos, especialmente em portadores de fibrose cística. Na cepa H111 de B. cenocepacia são observados cinco genes codificadores de possíveis proteínas H-NS, as quais, em outras bactérias, atuam como silenciadores globais da expressão gênica. Numa cepa mutante de H111 que teve um dos genes hns deletado, observa-se uma diminuição na taxa de crescimento, um aumento na formação de biofilme e uma redução na motilidade das células quando comparado com a linhagem parental. Esses fenótipos da cepa mutante são condizentes com a ativação de genes envolvidos na transição do estado móvel para o estado de biofilme, os quais na cepa parental devem estar silenciados pela proteína H-NS. Como as alterações observadas na cepa mutante reduzem o fitness celular sob condições ótimas de crescimento, neste estudo utilizamos um procedimento de evolução experimental com o objetivo de observar a reversão dos fenótipos do mutante e, posteriormente, identificar as alterações moleculares responsáveis por essa reversão. Para isso, o mutante foi cultivado continuamente por 22 dias em meio rico. Após sete dias de evolução, o mutante apresentou um aumento na taxa de crescimento, uma diminuição na formação de biofilme e um ligeiro aumento de motilidade. Após 15 e 22 dias, a formação de biofilme seguiu o padrão de redução, porém de modo mais discreto, tendendo a uma estabilização sem retornar aos níveis da linhagem parental. Numa tentativa de identificar genes cuja expressão poderia ser afetada pela evolução, os níveis de alguns transcritos foram analisados por RT-qPCR. Contudo, nenhuma redução significativa na expressão dos genes de formação de biofilme analisados foi observada, sugerindo que alterações em outros genes poderiam ser responsáveis pelas mudanças fenotípicas observadas durante a evolução da cepa mutante. Em conclusão, a evolução reverteu em parte os fenótipos, especialmente quanto à taxa de crescimento e à formação de biofilme.