DESVENDANDO A FUNÇÃO BIOLÓGICA DO GENE SCAV-1 DE CAENORHABDITIS ELEGANS

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Resumo

O CD36 é um receptor do tipo scavenger com diferentes funções biológicas, incluindo o metabolismo lipídico, cujos detalhes moleculares de funcionamento e interação com parceiros na membrana celular não são conhecidos. Pacientes deficientes nesse tipo de receptor apresentam dislipidemias, resistência insulínica e hipertensão. Este trabalho buscou elucidar os efeitos biológicos metabólicos provocados pela mutação do gene scav-1, o homólogo de CD36 em C. elegans, um nematódeo usado para experimentos laboratoriais. Para tal objetivo, os parâmetros de taxa de consumo de oxigênio, análise da massa mitocondrial, acúmulo de material bacteriano no lúmen intestinal, integridade da barreira intestinal, acúmulo de lipídeos neutros, formação de compartimentos ácidos e captação lipídica pelos enterócitos foram explorados. Por respirometria de alta resolução, observou-se que a taxa de consumo de oxigênio está reduzida nos animais mutantes. Para testar a hipótese se essa diferença consistia em quantidades reduzidas de mitocôndrias, foi medida a massa mitocondrial por meio da análise da atividade citrato sintase, a primeira enzima do ciclo do ácido cítrico. Os resultados mostraram que, ao ser normalizada pelo número de animais, há uma redução do número de mitocôndrias em animais mutantes, embora a normalização pela quantidade de proteína total não tenha fornecido diferenças significativas, indicando que animais mutantes tem menor massa mitocondrial devido à menor quantidade de proteínas corporais como um todo. Por meio da alimentação com uma bactéria fluorescente, observamos que os animais mutantes acumulam material bacteriano no lúmen intestinal, o que não foi observado nos animais selvagens. Esse achado é sugestivo para uma possível dificuldade de digestão ou alteração do trânsito intestinal, sendo necessário mais estudos para dados mais robustos. Além disso, para avaliar a integridade do epitélio intestinal, os animais foram incubados com o corante alimentício erioglaucina por 6 horas. Foi visto nos mutantes que, na região da cabeça, houve um extravasamento do corante, fato não observado nos animais selvagens, sugerindo perda da integridade da cutícula que recobre a boca logo no início da vida adulta em animais mutantes. Avaliamos os níveis de estoque lipídico dos enterócitos através do método de coloração com Oil Red O, um corante que se fixa em lipídios neutros. Os resultados mostraram que, nos animais mutantes, há uma redução significativa de lipídios em relação aos animais selvagens, além de uma mudança nítida da distribuição desse acúmulo lipídico ao longo do corpo do animal, ficando restrito às regiões dos ovos nos animais mutantes. Para investigar a capacidade de captação lipídica da dieta, observou-se a fluorescência do fluoróforo BODIPY 500/512 entre os animais, sendo avaliado a formação das gotículas lipídicas mais abundantes no animal selvagem do que no animal mutante. Em suma, embora mais experimentos sejam necessários para desvendar a função biológica de scav-1 em C. elegans, os resultados obtidos até aqui mostram que a deficiência de SCAV-1 exerce grande impacto na fisiologia do animal, como redução dos lipídios corporais e redução de consumo de oxigênio, sugerindo metabolismo energético reduzido.