CARACTERIZAÇÃO DA ATIVIDADE DE ENZIMA CONVERSORA DE ANGIOTENSINA I EM FUNGOS ENDOFÍTICOS

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Resumo

Introdução: Os fungos endofíticos destacam-se por sua capacidade de produzir enzimas de diversas classes, incluindo as peptidases, tornando-os valiosos para diferentes aplicações biotecnológicas. Nesse contexto, torna-se relevante investigar o potencial desses microrganismos na produção de isoformas da enzima conversora de angiotensina I (ECA I), uma metalopeptidase de grande importância na área da saúde humana. Essa biomolécula atua na homeostase circulatória, ao clivar a angiotensina I em angiotensina II, um potente vasoconstritor, além de promover a inativação da bradicinina, resultando na supressão de sua atividade vasodilatadora. Objetivo: Rastrear atividade proteolítica ECA-like em diferentes extratos de fungos endofíticos isolados de caule e folhas de Manihot esculenta, bem como cascas, caules e folhas de Theobroma cacao. Métodos: Os fungos isolados foram cultivados em meio batata dextrose ágar, por três crescimentos consecutivos. Após o terceiro repique, os micélios foram suspensos em 30 mL de tampão Tris 0,1 M pH 7,0 e macerados com auxílio de um Ultra-Turrax IKA com elemento dispersor S10N-10G. O macerado foi centrifugado a 8000 rpm e 4 °C, por 50 min, para obtenção do extrato enzimático (sobrenadante). O rastreamento da atividade proteolítica foi realizado a 37 °C, utilizando o substrato FRET seletivo Abz-FRK(Dnp)-P-OH, em tampão Tris 0,1 M pH 7,0 com 10 micromolar de cloreto de zinco. O aumento da fluorescência foi determinado em um espectrofluorímetro Hitachi F-2500, com excitação em 320 nm e emissão em 420 nm. A unidade de atividade (U) foi definida como a concentração em micromol de Abz liberada por minuto. Para determinação da atividade específica, a concentração de proteínas nos extratos foi determinada pela metodologia de Bradford. A inibição enzimática nos extratos que apresentaram as maiores atividades específicas foi realizada pela adição de 20 micromolar de lisinopril. Resultados: Entre as amostras de extratos dos fungos endofíticos analisados, o isolado de folha de mandioca (FO2), identificado como Xylaria sp., apresentou a maior atividade específica (6,95 U/mg), sendo significativamente superior à observada para os extratos dos demais fungos, que apresentaram valores inferiores a 0,6 U/mg. Além disso, na presença do inibidor seletivo lisinopril ocorreu uma redução de 80,2% na atividade enzimática. Conclusão: Os resultados obtidos nos experimentos de hidrólise do substrato FRET seletivo e de inibição com lisinopril sugerem a presença de atividade ECA-like nos extratos dos fungos endofíticos analisados, com destaque para o microrganismo Xylaria sp. Esses achados evidenciam um potencial de produção da peptidase alvo, o qual será explorado nas futuras etapas de purificação, caracterização bioquímica e estudos filogenéticos, importantes para o entendimento do processo evolutivo do sistema renina-angiotensina.